ในการทำงานด้าน Cell culture การนับเซลล์เป็นขั้นตอนที่สำคัญในการทำงาน โดยผู้วิจัยจะต้องทำการนับเซลล์ให้ได้ความเข้มข้นของเซลล์ที่ถูกต้อง แม่นยำ เพื่อนำไปทำการทดลองต่อ การนับเซลล์โดยใช้สไลด์ Hemocytometer (ภาพที่ 1) เป็นเทคนิคที่มักถูกนำมาใช้ในการนับปริมาณเซลล์ โดย Hemocytometer เป็นสไลด์นับเซลล์ที่ใช้ในการนับจำนวนเซลล์ในตัวอย่างของเหลว โดยภายในสไลด์จะมีลักษณะสี่เหลี่ยมขนาดเล็กๆ เพื่อช่วยในการหาตำแหน่งของเซลล์ที่ต้องการนับ
ภาพที่1. ตัวอย่าง Hemocytometer
(Source: Indiamart, n.d.)
วิธีการนับเซลล์โดยใช้ Hemocytometer มีขั้นตอนดังนี้
- เตรียมตัวอย่าง
- เตรียมตัวอย่างที่ต้องการนับ เช่น เซลล์ที่ถูกเพาะเลี้ยงในห้องปฏิบัติการ เซลล์เม็ดเลือด หรือแบคทีเรีย เป็นต้น ซึ่งจะต้องมีการย้อมสีด้วย Trypan blue เพื่อแบ่งจำแนกเซลล์ที่มีชีวิตและเซลล์ที่ตาย โดยทำการผสมเซลล์และสี Trypan blue โดยทั่วไปจะใช้อัตราส่วน 1:1
- โหลดตัวอย่างใส่ใน Hemocytometer
- วางแผ่น cover slip ลงบนสไลด์แล้วใช้ปิเปตโหลดตัวอย่างที่ขอบของ cover slip เติมตัวอย่างในช่องของ Hemocytometer ให้เต็มทั้งหมด และควรให้ตัวอย่างกระจายอย่างทั่วถึงในช่องเพื่อให้การนับเป็นไปได้ที่แม่นยำ
- การนับเซลล์
- ในการหาปริมาณเซลล์ที่ยังมีชีวิตอยู่ จะทำการนับจำนวนเซลล์ที่ย้อมไม่ติดสีของ Trypan blue ซึ่งการนับจำนวนเซลล์ ให้นับเซลล์ที่อยู่ใน 4 ช่องใหญ่ด้านนอก (รูปภาพที่2 – ตารางสีแดง) กรณีที่มีเซลล์อยู่บนเส้นขอบช่องใหญ่แบ่ง ให้นับเฉพาะเซลล์ที่อยู่บนเส้นขอบด้านบนหรือด้านล่าง และขอบด้านซ้าย หรือด้านขวาเท่านั้น
ภาพที่ 2 แสดงตารางภายใน Hemocytometer
- การคำนวณผลลัพธ์
- หลังจากนับเซลล์เรียบร้อยแล้วให้คำนวณหาปริมาณเซลล์ในตัวอย่าง โดยใช้สูตร
แต่อย่างไรก็ตามในการใช้งาน Hemocytometer ยังมีข้อควรระวังเมื่อสไลด์ที่นำมาใช้หลังจากการล้างจะต้องแห้งและสะอาด เนื่องจากหากมีน้ำจากการล้างปนเปื้อนในสไลด์ อาจทำให้ปริมาตรของเซลล์ที่นำมาโหลดใส่มีความคลาดเคลื่อน ส่งผลให้ได้ความเข้มข้นของเซลล์ไม่แม่นยำ ดังนั้นแล้วในการนับเซลล์เพื่อหาปริมาณเซลล์ สามารถเลือกใช้สไลด์แบบไม่ใช้ซ้ำ ซึ่ง C-Slide (ภาพที่ 3) เป็นสไลด์ที่ใช้ร่วมกับเครื่องนับเซลล์อัตโนมัติ FACSCOPE B แต่ก็ยังสามารถใช้นับเซลล์ภายใต้กล้องจุลทรรศน์ได้ไม่ต่างจากใช้ hemocytometer แบบปกติ เนื่องจากภายใน c-slide มีลักษณะตารางที่ใช้ในการนับเซลล์เหมือนกับตารางของ hemocytometer และในการใช้ c-slide ยังสามารถนับตัวอย่างเซลล์ได้ถึง 4 ตัวอย่างด้วยกันใน 1 สไลด์ และยังช่วยลดปัญหาการคลาดเคลื่อนของปริมาตรจากการล้างและความสะอาดของสไลด์อีกด้วย
ภาพที่ 3: C-slides
Ordering information
|
Product |
Cat No./ID: |
|
C-Slide®, 50 slide/box (200 test) |
CRCSD-NI50 |
สนใจสอบถามรายละเอียดเพิ่มเติม
ติดต่อ Info@biodesign.co.th หรือ Line: @BioDesign หรือ https://www.facebook.com/BioDesignTH
“บทความผลิตภัณฑ์โดย คุณอัจฉริยา พรหมจรรยา Product Specialist บริษัท ไบโอดีไซน์ จำกัด”
